Действие фильма разворачивается в XV веке в Италии и служит приквелом к компьютерной игре «Assassin’s Creed II». В центре сюжета – Джованни Аудиторе де Фиренце, отец главного героя последующей части игры. Джованни – ассасин, действующий в эпоху Ренессанса. В это время коррумпированная семья плетет заговор, стремясь свергнуть могущественных Медичи и разрушить единство Италии. Джованни должен противостоять этому заговору и восстановить справедливость. Фильм показывает события, предшествующие «Assassin’s Creed II», и знакомит зрителя с врагами и окружением как главного героя, так и его сына.